Μέθοδος αλληλούχισης κατά Sanger.

Abstract

Αναπαράσταση της ενζυμικής μεθόδου αλληλούχισης κατά Sanger. α) Σε κάθε αντίδραση αλληλούχισης κατά Sanger προστίθεται το μόριο DNA προς αλληλούχιση (που δρα ως εκμαγείο DNA), ένας εκκινητής, πολυμεράση, τα τέσσερα dNTPs και τα φθοριοσημασμένα διδεοξυνουκλεοτίδια. Καθώς τα dNTPs είναι σε περίσσεια στην αντίδραση, τα ddNTPs ενσωματώνονται τυχαία σε διάφορες θέσεις του<br/>μορίου DNA, με αποτέλεσμα να δημιουργείται ένα μίγμα τμημάτων DNA, το μέγεθος των οποίων εξαρτάται από τη θέση ενσωμάτωσης του ddNTP. β) Τα προϊόντα που προκύπτουν υποβάλλονται σε τριχοειδική ηλεκτροφόρηση σε αυτόματους αναλυτές αλληλουχίας. Στο τέλος της ηλεκτροφόρησης το κάθε φθοροσημασμένο προϊόν DNA περνάει από το σύστημα ανίχνευσης, που αναγνωρίζει τη χρωστική (και κατα<br/>συνέπεια τη βάση) που φέρει κάθε προϊόν στο 3’ άκρο του.